植物體細胞培養基操作
樓主好！！ 實驗八 培養基的制備與滅菌 一、目的要求1. 掌握微生物實驗室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2. 掌握培養基的配置方法。3. 掌握干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌的操作方法。二、基本原理 正確掌握培養基的配制方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎。由于微生物種類及代謝類型的多樣性．因而用于培養微生物的培養基的種類也很多，它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養基的配制程序卻大致相同．例如器皿的準備，培養基的配制與分裝，棉塞的制作，培養基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養基的無菌檢查等基本環節大致相同。三、實驗材料1. 藥品：待配各種培養基的組成成分、瓊脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。2. 儀器及玻璃器皿：天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、三角瓶、培養皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花等。四、操作步驟（一）玻璃器皿的洗滌和包裝1．玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將三角瓶、試管、培養皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中．用毛刷刷洗，然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡，再用自來水及蒸餾水沖洗。洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。2．滅菌前玻璃器皿的包裝（1） 培養皿的包扎：培養皿由一蓋一底組成一套，可用報紙將幾套培養皿包成一包，或者將幾套培養皿直接置于特制的鐵皮圓筒內，加蓋滅菌。包裝后的培養皿須經滅菌之后才能使用。（2）
圖8-1 移液管的包扎移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脫脂棉)，它的作用是避免外界及口中雜菌進入管內，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應距管口約0.5cm左右，棉花自身長度約1~1.5cm。塞棉花時．可用一外圍拉直的曲別針、將少許棉花塞入管口內。棉花要塞得松緊適宜，吹時以能通氣而又不使棉花滑下為準。先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條，然后將已塞好棉花的移液管尖端放在長條報紙的一端，約成45℃角，折疊紙條包住尖端，用左手握住移液管身，有手將移液管壓緊．在桌面上向前搓轉，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結，準備滅菌。（二）液體及固體培養基的配制過程1．液體培養基配制1) 稱量：一般可用0.01g天平稱量配制培養基所需的各種藥品，先按培養基配方計算出各成分的用量．然后進行準確稱量。2) 溶解：將稱好的藥品置于一燒杯中，先加入少量水(根據實驗需要可用自來水或蒸餾水)，用玻璃棒攪動，加熱溶解。3) 定容：待全部藥品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需體積。如某種藥品用量太少時，可預先配成較濃溶液，然后按比例吸取一定體積溶液，加入至培養基中。4) 調pH：一般用pH試紙測定培養基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙，然后用鑷子夾取此段pH試紙，在培養基中蘸一下，觀看其pH范圍，如培養基偏酸或偏堿時，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液進行調節。調節pH時，應逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養基中成分。邊加邊攪拌，并不時用pH試紙測試，直至達到所需pH為止。5) 過濾：用濾紙或多層紗布過濾培養基。一般無特殊要求時，此步可省去。2．固體培養基的配制 配制固體培養基時，應將已配好的液體培養基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂(1.5~2％)加入，并用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續加熱至瓊脂全部融化，最后補足因蒸發而失去水分。（三）培養基的分裝 根據不同需要，可將已配好培養基分裝入試管或三角瓶內，分裝時注意不要使培養基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培養基沾污管口或瓶口時，可用鑷子夾一小塊脫脂棉，擦去管口或瓶口的培養基，并將脫脂棉棄去。1．試管的分裝取一個玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下連一根橡皮管，橡皮管下端再與另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一彈簧夾。分裝時，用左手拿住空試管中部，并將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內，以右手拇指及食指開放彈簧夾，中指及無名指夾佐玻璃管嘴，使培養基直接流入試管內。裝入試管培養基的量視試管大小及需要而定，若所用試管大小為15×150 mm時，液體培養基可分裝至試管高度1／4左有為宜；如分裝固體或半固體培養基時，在瓊脂完全融化后，應趁熱分裝于試管中。用于制作斜面的固體培養基的分裝量為管高1／5(約3—4mI)，半固體培養基分裝量為管高的1／3為宜。2．三角瓶的分裝圖8-2培養基的分裝 用于振蕩培養微生物時，可在250 m1三角瓶中加入50 m1的液體培養基；若用于制作平板培養基用時，可在250 m1三角瓶中加入150ml培養基，然后再加入3g瓊脂粉(按2％計算)，滅菌時瓶中瓊脂粉同時被融化。（四）棉塞的制作及試管、三角瓶的包扎 為了培養好氣性微生物，需提供優良通氣條件，同時為防止雜菌污染，則必須對通入試管或三角瓶內空氣預先進行過濾除菌。通常方法是在試管及三角瓶口加上棉花塞等。1．試管棉塞的制作制棉塞時，應選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成的團孔上，用右手食指將棉花從中央壓入團孔中制成棉塞．然后直接壓入試管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊卷塞法制作棉塞。制作的棉塞應緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準。棉塞的2／3在試管內，1／3在試管外。目前也有采用硅膠塞代替棉塞直接蓋在試管口上。將裝好培養基并塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。用記號筆注明培養基名稱及配制日期，滅菌待用。
圖8-3 棉塞的制作
圖8-4 正確與不正確的棉塞1.金屬塞 2正確 3、4不正確 2．三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時為了進行液體振蕩培養加大通氣量，則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅膠塞直接蓋在瓶口上。在裝好培養基并塞好棉塞或包扎八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上，再包上一層牛皮紙并用線繩捆好，滅菌待用。（五）培養基的滅菌培養基經分裝包扎后，應立即按配制方法規定的滅菌條件進行進行高壓蒸汽滅菌。（六）斜面和平板的制作1．斜面的制作將已滅菌裝有瓊脂培養基的試管，趁熱置于木棒或玻棒上，使成適當斜度，凝固后即成斜面。斜面長度不超過試管長度l／2為宜。如制作半團體或固體深層培養基時，滅菌后則應垂直放置至凝固。2．平板的制作將裝在三角瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養基融化后，待冷至50℃左右傾入無菌培養皿中。溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低于50℃，培養基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應在火旁進行，左手拿培養皿，右手拿三角瓶的底部或試管，左手同時用小指和手掌將棉塞打開，灼燒瓶口，用左手大拇指將培養皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，傾入10~15mL培養基，迅速蓋好皿蓋，置于桌上，輕輕旋轉平皿，使培養基均勻分布于整個平皿中，冷凝后即成平板。（七）培養基的滅菌檢查滅菌后的培養基，一般需進行無菌檢查。最好取出1~2管(瓶)，置于37℃溫箱中培養1~2天，確定無菌后方可使用。（八）無菌水的制備在每個250mL的三角瓶內裝100mL的蒸餾水并塞上棉塞或硅膠塞。在每支試管內裝4.5mL蒸餾水，塞上棉塞或硅膠塞。再在棉塞上包上一張牛皮紙，高壓蒸汽滅菌。0.1MPa滅菌20~30min。五、實驗內容1. 根據要求清洗各種玻璃器皿，并進行包扎。2. 根據要求配制各種培養基。3. 用電熱鼓風干燥箱對玻璃器皿進行干熱滅菌。4. 用高壓蒸汽滅菌鍋對所配各培養基滅菌。六、實驗報告1. 簡述移液管和培養皿的包扎注意事項。2. 簡述配制培養基的基本步驟及注意事項。3. 為什么微生物實驗室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花，再用報紙包起來，經高壓蒸汽滅菌后才能使用?4. 為什么微生物實驗室所用的三角瓶口或試管口都要塞上棉塞（硅膠塞）才能使用？5. 配制培養基時為什么要調節pH？6. 高壓蒸汽滅菌為什么比干熱滅菌要求溫度低、時間短？ 附錄 滅菌技術一、目的要求了解消毒和滅菌的原理，并掌握各種滅菌方法的操作步驟。二、實驗材料1. 儀器或其他用具：上述包扎的培養皿、試管、移液管等，電熱鼓風干燥箱，高壓蒸汽滅菌鍋，微孔濾膜過濾器，0.22μm濾膜，注射器，鑷子，玻璃涂棒。2. 培養基：上述配制的培養基及生理鹽水三、基本原理在微生物實驗中，需要進行純培養，不能有任何雜菌污染，因此必須對所用器材、培養基和工作場所進行滅菌和消毒。滅菌是指殺死一定環境中的所有微生物，包括微生物的營養體、芽孢和孢子。實驗室常用的滅菌方法包括直接灼燒、恒溫干燥箱滅菌、高壓蒸汽滅菌、間歇滅菌、煮沸滅菌等方法。這些方法的基本原理是通過加熱使微生物體內蛋白質凝固變性，從而達到滅菌的目的。四、操作步驟（一）干熱滅菌法干熱滅菌是在電熱干燥箱內利用高溫干燥空氣（160℃~170℃）進行滅菌，它是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌目的。此法適用于玻璃器皿如移液管、試管和培養皿的滅菌。培養基、橡膠制品、塑料制品不能采用干熱滅菌。細胞內的蛋白質凝固性與其本身的含水量有關，在菌體受熱時，當環境和細胞內含水量越大，則蛋白質凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160℃~170℃），時間長（1~2h）。但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。干熱滅菌使用的是電熱干燥箱（干燥箱）。具體操作步驟如下：1. 裝入待滅菌物品：將包好的待滅菌物品放入電熱干燥箱內，關好箱門。堆積時要留有空隙，物品不要擺放得太擠，以免妨礙空氣流通，滅菌物品不要接觸電熱干燥箱內壁的鐵板、溫度探頭，以防包裝紙烤焦起火。2. 升溫：接通電源，打開開關，適當打開電熱干燥箱頂部的排氣孔，旋動恒溫調節器，使溫度逐步上升。當溫度升至100℃時，關閉排氣孔。在升溫過程中，如果紅燈熄滅，綠燈亮，表示電熱干燥箱內停止加溫，此時如果還未達到所需的160℃~170℃，則需要轉動溫度調節器使紅燈亮，如此反復調節，直至達到所需的溫度。3. 恒溫：當溫度升到160℃~170℃時，借助恒溫調節器的自動控制，保持此溫度2h。干熱滅菌過程中，嚴防恒溫調節的自動控制失靈而造成安全事故。4. 降溫：切斷電源，自然降溫。5. 開箱取物：待電熱干燥箱內溫度降到60℃以下后，才能打開箱門，取出滅菌物品。同時，應將溫度調節旋鈕調到零點，并打開排氣孔。電熱干燥箱內溫度未降到60℃以前，切勿自行打開箱門，以免驟然降溫導致玻璃器皿炸裂。（二）高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內，在一定的壓力下保持15~30分鐘進行滅菌。此法適用于培養基、無菌水、工作服等物品的滅菌，也可用于玻璃器皿的滅菌。將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋夾套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中排盡，然后關閉排氣閥，繼續加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌鍋內的壓力，從而使沸點增高，獲得高于100℃的溫度，導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。在相同的溫度下，濕熱滅菌的效果好于干熱滅菌。有三點原因：在濕熱滅菌中菌體吸收水分，蛋白質容易凝固變性，蛋白質隨著含水量的增加，所需凝固溫度降低；濕熱滅菌中蒸汽的穿透力比干燥空氣大；蒸汽在被滅菌物體表面凝結，釋放出大量的汽化潛熱，能迅速提高滅菌物體表面的溫度，從而增加滅菌效力。實驗室常用的滅菌鍋有非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋和自控式滅菌鍋，其結構和工作原理是相同的。本實驗介紹的是非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋，自控式滅菌鍋的使用可參考廠家說明書。具體操作步驟如下：1. 加水：首先將內層鍋取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面沒過加熱蛇管，與三角擱架相平為宜。切勿忘記檢查水位，加水量過少，滅菌鍋會發生燒干引起炸裂事故。2. 裝料：放回內層鍋，并裝入待滅菌的物品。注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。裝有培養基的容器放置時要防止液體溢出，三角瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包扎的紙而透入棉塞。3. 加蓋：將蓋上與排氣孔相連的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內，擺正鍋蓋，對齊螺口，然后以對稱方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣，并打開排氣閥。4. 排氣：打開電源加熱滅菌鍋，將水煮沸，使鍋內的冷空氣和水蒸汽一起從排氣孔中排出。一般認為當排出的氣流很強并有噓聲時，表明鍋內的空氣已排盡，沸騰后約需5分鐘。5. 升壓：冷空氣完全排盡后，關閉排氣閥，繼續加熱，鍋內壓力開始上升。6. 保壓：當壓力表指針達到所需壓力時，控制電源，開始計時并維持壓力至所需的時間。如本實驗中采用0.1Mpa，121.5℃，20分鐘滅菌。滅菌的主要因素是溫度而不是壓力，因此鍋內的冷空氣必須完全排盡后，才能關閉排氣閥，維持所需壓力。7. 降壓：達到滅菌所需的時間后，切斷電源，讓滅菌鍋溫度自然下降，當壓力表的壓力降至“0”后，方可打開排氣閥，排盡余下的蒸汽，旋松螺栓，打開鍋蓋，取出滅菌物品，倒掉鍋內剩水。壓力一定要降到“0”后，才能打開排氣閥，開蓋取物。否則就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基或試劑由于內外壓力不平衡而沖出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼傷操作者。8. 無菌檢查：將已滅菌的培養基放入37℃恒溫培養箱培養24h，檢查無雜菌生長后，即可使用。 （三）過濾除菌有些物質，如抗生素、血清、維生素、糖溶液等采用加熱滅菌法時，容易受熱分解而被破壞，因而要采用過濾除菌法。過濾除菌是通過機械作用濾去液體或氣體中細菌的方法，該方法最大的優點是不破壞溶液中各種物質的化學成分。過濾除菌法除實驗室用于溶液、試劑的除菌外，在微生物工作中使用的凈化工作臺也是根據過濾除菌的原理設計的，可根據不同的需要來選用不同的濾器和濾板材料。應用最廣泛的過濾器種類有：1. 微孔濾膜過濾器：是一種新型過濾器，它由上下二個分別具有出口和入口連接裝置的塑料盒組成，出口處可連接針頭，入口處可連接針筒，使用時將濾膜裝入兩塑料盒之間，旋緊盒蓋，當溶液從針筒注入濾器時，各種微生物被阻留在微孔濾膜上面，而液體和小分子物質通過濾膜，從而達到除菌的目的。其濾膜是由硝酸纖維素、醋酸纖維素等制成的薄膜，有孔徑大小不同的多種規格（如0.1μm、0.22μm、0.3μm、0.45μm等），實驗室中用于除菌的微孔濾膜孔徑一般為0.22μm。根據待除菌溶液量的多少，可選用不同大小的濾器。該濾器的優點是吸附性小，即溶液中的物質損耗少，過濾速度快，每張濾膜只使用1次，不用清洗。2. 蔡氏（Seitz）過濾器：是一種金屬制成的過濾漏斗，其過濾部分是一種用石棉纖維和其他填充物壓制成的片狀結構。溶液中的細菌通過石棉纖維的吸附和過濾而被去除，但對溶液中其他物質的吸附性也大，每張纖維板只能使用1次。3. 玻璃過濾器：是一種玻璃制成的過濾漏斗，其過濾部分是由細玻璃粉燒結成的板狀構造。玻璃濾器的規格很多，5號（孔徑2~5μm）和6號（孔徑<2μm）適用于過濾細菌，其優點是吸附量少，但每次使用后要洗凈再用。本實驗采用微孔濾膜過濾器進行過濾除菌，具體操作步驟如下：1. 組裝、滅菌：將0.22
化學：玻璃儀器的洗滌
玻璃儀器內任何一點沾污，都可能影響到實驗結果。因此，玻璃儀器要始終保持干燥潔凈，每次實驗前要檢查是否潔凈，實驗后要及時清洗、晾干。
對一般實驗來說要求玻璃儀器洗滌后，其內壁附著的水很均勻，既不聚成水滴，也不成股流下，晾干后不留水痕即可。
在洗滌之前要先了解它是被什么污物所污染，再決定采用相應的洗滌方
法。儀器用畢應立即清洗，一般可依照：傾去廢物——冷卻——用水沖洗——刷洗——用水沖洗的順序進行。如果儀器內壁附著有不易涮掉的物質，要使用試管刷(或燒瓶刷)。使用試管刷在盛水的試管里轉動或上下移動時，不可用力過猛，以防戳破管底。最好是選準手指捏持試管刷柄的部位，使試管刷的鐵絲端碰不到管底為好。
若儀器內壁附著不溶于水的堿、碳酸鹽、堿性氧化物等物質，可先用少量稀鹽酸溶解，再反復用水沖洗。若附著少量油污，就會掛附水珠，可用適合的刷子蘸少量洗衣粉(或洗潔精)刷洗，刷凈后再反復用水沖洗。
洗凈的儀器可倒置在不被碰撞的地方(如將試管倒插在試管架上)晾干備用。
但是，注意：洗滌干凈的標準是：既不聚成水滴，也不成股流下
注意的分配實驗
1、常用玻璃儀器的準備
制備培養基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈，晾干后備用。
（1）平皿用紙或布包好，或裝在金屬盒內，于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干，備用。
（2）試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，再用布或報紙包扎好，121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干，備用。
（3）吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽內的氣體污染），然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內，于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干，備用。其他玻璃器皿均應按上法處理，也應裝金屬筒內160℃干熱滅菌2h后，備用。
2、培養基的制備及儲存
（1）溶化：一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內。加入蒸餾水，隔水加熱以促其溶解，加熱時應經常攪拌，防止焦結，待其溶解后補足水分。
在使用干燥培養基時，先將蒸餾水按定量加入容器中，然后稱取一定量培養基干粉放入水中，靜置10—15min，攪拌，振蕩，或延長時間以促進溶解，一般不要熱，必要時加熱，但時間不宜過長，溫度不宜過高，避免某些營養成分被破壞。
（2）校正酸堿度（調節pH）：培養基必須有適當的pH。因此測定pH是培養基配制過程中的重要步驟之一，測定pH的標準溫度為25士2℃。調節pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。當調節緩沖液的pH時，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液。滅菌后的pH會比滅菌前的pH升高或降低，一般高壓滅菌前培養基的pH會比最終pH調高0.2左右，滅菌后基本合適。因此對培養基、緩沖液、試劑在滅菌前后的pH均進行測定，并記下每次pH的測定結果，有助于積累數據考察每種培養基、緩沖液、試劑對滅菌程序的耐受性，從而指導滅菌前pH的調節。干燥培養基一般已校正過pH，用時也必須再驗證。測定時，一般用指示劑滴入培養基觀察其顏色的變化，或用pH計校正，如與所需pH不符，可用以上的酸或堿液加以校正。調整pH后要加熱過濾，使培養基澄清。
（3）培養基的分裝：大批量配制時使用的自動分配器須經校準和確認。每次使用前后，均要對分配器的管道系統進行沖洗，在分裝無菌培養基前，則要采用無菌硅膠管。
固體培養基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中，高壓滅菌后根據需要分裝平皿或試管。
平皿：傾注平皿，應在無菌室中放置3—4h，如用塑料平皿須在35℃培養箱 中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發。
斜面：制備低層斜面分裝于試管，約占容積1/5，滅菌后趁熱斜放在細玻璃棒和木桿上，使成斜度，分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養基，如沾有培養基應用布抹去，以避免污染。
高層斜面：制備高層斜面分裝于試管，約占試管容積的1/3，滅菌后趁熱放置成高層短斜面，待其凝固后應用。
分裝好的培養基或緩沖液等及時密封后必須在配制當天（2h內最佳）進行滅菌處理。液體、半固體培養基一般在高壓滅前分裝，約裝試管容積的1/3，在滅菌后還要加其他成分的液體、半固體培養基，滅菌后再分裝于滅菌試管或錐形瓶中。
培養基的滅菌：培養基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌，各種培養基的滅菌時間和壓力，按其成分不同而定。普通培養基采用121℃、103.42kPa滅菌15min，但容器和裝量較大時，應延長至20min。含糖培養基115℃、68.85kPa滅菌30min。含糖、血清、雞蛋等培養基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，連續3d，間歇滅菌。血清或組織液，采用低熱56—58水浴1h，連續5—6d滅菌，一些遇高溫即被破壞的物質如尿素、腹水等，可用細菌過濾器，過濾除菌。高壓滅菌應嚴格按照操作規程執行，必須逐漸加熱，徹底排除滅菌器內的空氣，再逐漸升壓保持預定的壓力和時間，達到全部殺滅微生物。以上的滅菌時間和溫度要經過驗證確認，如不同類型培養基混合一起滅菌時宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。
某同學進行玻璃器皿的滅菌,步驟為清洗 – 煮沸 – 高溫烘干滅菌,但是滅過菌后發現產生了染菌的現象,通過鏡檢發
高溫滅菌是可以的,但是你的玻璃器皿肯定沒有包裝物,這樣,滅菌好的玻璃器皿從烘箱中取出后,有染菌的現象.建議試試那種紙耐高溫(你對器皿滅菌的溫度即可),把玻璃器皿包裝上,再去滅菌.另外,條件允許,采用蒸汽滅菌,但也要有包裝!
玻璃器皿的清洗,包扎,滅菌時容易出現的問題
請參考:http://wk.baidu.com/view/7edfd029192e45361166f501?pcf=2#page/1/1444698838406
如何清洗微生物實驗室的玻璃器皿
1．新玻璃器皿的洗滌方法
新購置的玻璃器皿含游離堿較多，應在酸溶液內先浸泡數小時。酸溶液一般用2％的鹽酸或洗滌液（見本小節“3”）。浸泡后用自來水沖洗干凈。
2．使用過的玻璃器皿的洗滌方法
(1)試管、培養皿、三角燒瓶、燒杯等可用瓶刷或海綿沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗滌劑刷洗，然后用自來水充分沖洗干凈。熱的肥皂水去污能力更強，可有效地洗去器皿上的油污。洗衣粉和去污粉較難沖洗干凈而常在器壁上附有一層微小粒子，故要用水多次甚至10次以上充分沖洗，或可用稀鹽酸搖洗一次，再用水沖洗，然后倒置于鐵絲框內或有空心格子的木架（圖Ⅰ-10）上，在室內晾干。急用時可盛于框內或搪瓷盤上，放烘箱烘干。
玻璃器皿經洗滌后，若內壁的水是均勻分布成一薄層，表示油垢完全洗凈，若掛有水珠，則還需用洗滌液浸泡數小時，然后再用自來水充分沖洗。
裝有固體培養基的器皿應先將其刮去，然后洗滌。帶菌的器皿在洗滌前先浸在2％煤酚皂溶液（來蘇爾）或0．25％新潔爾滅消毒液內24小時或煮沸半小時，再用上法洗滌。帶病原菌的培養物最好先行高壓蒸汽滅菌，然后將培養物倒去，再進行洗滌。
盛放一般培養基用的器皿經上法洗滌后，即可使用，若需精確配制化學藥品，或做科研用的精確實驗，要求自來水沖洗干凈后，再用蒸餾水淋洗三次，晾干或烘干后備用。
(2)玻璃吸管吸過血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管（包括毛細吸管），使用后應立即投入盛有自來水的量筒或標本瓶內，免得干燥后難以沖洗干凈。量筒或標本瓶底部應墊以脫脂棉花，否則吸管投入時容易破損。待實驗完畢，再集中沖洗。若吸管頂部塞有棉花，則沖洗前先將吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，用水將棉花沖出，然后再裝入吸管自動洗滌器內沖洗，沒有吸管自動洗滌器的實驗室可用沖出棉花的方法多沖洗片刻。必要時再用蒸餾水淋洗。洗凈后，放搪瓷盤中晾干，若要加速干燥，可放烘箱內烘干。
吸過含有微生物培養物的吸管亦應立即投入盛有2％煤酚皂溶液或0．25％新潔爾滅消毒液的量筒或標本瓶內，24小時后方可取出沖洗。
吸管的內壁如果有油垢，同樣應先在洗滌液內浸泡數小時，然后再行沖洗。
(3)載玻片與蓋玻片用過的載玻片與蓋玻片如滴有香柏油，要先用皺紋紙擦去或浸在二甲苯內搖晃幾次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10分鐘，用軟布或脫脂棉花擦試，立即用自來水沖洗，然后在稀洗滌液中浸泡0．5—2小時，自來水沖去洗滌液，最后用蒸餾水換洗數次，待干后浸于95％酒精中保存備用。使用時在火焰上燒去酒精。用此法洗滌和保存的載玻片和蓋玻片清潔透亮，沒有水珠。
檢查過活菌的載玻片或蓋玻片應先在2％煤酚皂溶液或0．25％新潔爾滅溶液中浸泡24小時，然后按上法洗滌與保存。
科研實驗前準備基本常識
樓主你好：
（一）實驗玻璃器皿的洗滌
分析化學實驗室經常使用玻璃容器和瓷器，用不干凈的容器進行實驗時，往往由于污物和雜質的存在而得不到準確的結果。所以容器應該保證干凈。
洗滌容器的方法很多，應根據實驗的要求，污物的性質和玷污的程度加以選擇。
一般來說，附著在儀器上的污物有塵土和其他不溶性物質、可溶性物質、有機物質及油污等。針對這些情況，可采用下列方法：
①用水刷洗：用自來水和毛刷刷洗容器上附著的塵土和水溶物。
② 用去污粉（或洗滌劑）和毛刷刷洗容器上附著的油污和有機物質。若仍洗不干凈，可用熱堿液洗。容量儀器不能用去污粉和毛刷刷洗，以免磨損器壁，使體積發生變化。
③ 用還原劑洗去氧化劑如二氧化錳。
④ 進行定量分析實驗時，即使少量雜質也會影響實驗的準確性。這時可用洗液清洗容量儀器。洗液是重鉻酸鉀在濃硫酸中的飽和溶液。（5g粗重鉻酸鉀溶于10mL熱水中，稍冷，在攪拌下慢慢加入100mL濃硫酸中就得到鉻酸洗液，簡稱洗液）。
使用洗液時要注意以下幾點：
① 使用洗液前最好先用水或去污粉將容器洗一下。
② 使用洗液前應盡量把容器內的水去掉，以免將洗液稀釋。
③ 洗液用后應倒入原瓶內，可重復使用。
④ 不要用洗液去洗滌具有還原性的污物（如某些有機物），這些物質能把洗液中的重鉻酸鉀還原為硫酸鉻（洗液的顏色則由原來的深棕色變為綠色）。已變為綠色的洗液不能繼續使用。
⑤ 洗液具有很強的腐蝕性，會灼傷皮膚和破壞衣物。如果不慎將洗液灑在皮膚、衣物和實驗桌上，應立即用水沖洗。
⑥ 因重鉻酸鉀嚴重污染環境，應盡量少用洗液。用上述方法洗滌后的容器還要用水洗去洗滌劑。并用蒸餾水再洗滌三次。
洗滌容器時應符合少量（每次用少量的洗滌劑）多次的原則。既節約，又提高了效率。已洗凈的容器壁上，不應附著不溶物或油污。這樣的器壁可以被水完全潤濕。檢查是否洗凈時，將容器倒轉過來，水即順著器壁流下，器壁上只留下一層既薄又均勻的水膜，而不應有水珠。
（二）試劑及其取用方法
1.試劑的分類
根據化學試劑的純度，按雜質含量的多少，國內將化學試劑分為四級：
一級試劑（優級純試劑）通常用G.R表示。
二級試劑（分析純試劑）通常用A.R表示。
三級試劑（化學純）通常用C.P表示。
四級試劑（實驗或工業試劑）通常用L.R表示。
生物試劑 通常用B.R或C.R表示。
此外，根據特殊的工作目的，還有一些特殊的純度標準。例如光譜純、螢光純、半導體純等。取用時應按不同的實驗要求選用不同規格的試劑。例如一般無機實驗用三級或四級試劑即可，分析實驗則需取用純度較高的二級甚至一級試劑。更多質量檢測、分析測試、化學計量、標準物質相關技術資料請參考中檢所標準品對照品 www.rmhot.com
2.試劑的包裝
固體試劑一般裝在帶膠木塞的廣口瓶中，液體試劑則盛在細口瓶中（或滴瓶中），見光易分解的試劑（如硝酸銀）應裝在棕色瓶中，每一種試劑都貼有標簽以表明試劑的名稱、濃度、純度。（實驗室分裝時，固體只標明試劑名稱，液體還須注名明濃度）。
3.試劑的取用
固體粉末試劑可用潔凈的牛角勺取用。液體試劑常用量筒量取。
為了達到準確的實驗結果，取用試劑時應遵守以下規則，以保證試劑不受污染和不變質：
(1)試劑不能與手接觸。
(2)要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，絕對不準用同一種工具同時連續取用多種
試劑。取完一種試劑后，應將工具洗凈（藥勺要擦干）后，方可取用另一種試劑。
(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后
將瓶放回原處。
(4)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內。
（三）滴定分析
1 滴定分析對化學反應的要求
滴定分析法是以化學反應為基礎的，選擇分析方法和實驗條件都要以此為出發點。可以進行的化學反應雖然很多，但能作為滴定分析用的反應，一定得滿足下列要求。
（1）反應必須定量地完成
化學反應按一定的反應方程式進行，即反應具有確定的化學計量關系，并且進行得相當完全（通常要求達到99.9%左右），不存在副反應。只有這樣才能進行定量計算。
（2）應必須迅速地完成
整個滴定過程一定要在很短的時間內完成，如果反應速度比較慢，可以用加熱或加入催化劑等措施來加快反應速度。
（3）可用指示劑或儀器分析法確定反應的化學計量點
有的反應達到化學計量點，靠滴定劑本生就可以確定。例如用KMnO4滴定還原劑時，過量一滴KMnO4溶液就會使無色溶液顯出淡紅色。但這樣的反應是不多的，通常需借助指示劑的顏色變化來指示化學計量點。有時也利用溶液受電能或光能作用所產生的性質變化來指示化學計量點。
在細胞培養中,玻璃器皿用鉻酸洗液洗消到底是否是必要的?如果清洗干凈后直接高壓滅菌可以嗎?
你要保證你清洗的干凈,用洗滌靈.蒸餾水沖后水不是呈柱狀流.如果你之前所有人都是用鉻酸洗液清洗的,我勸你還是依照大家的方法比較穩妥,因為在器皿上殘留的不僅僅是菌,只通過滅菌只能將菌殺死,而其他成分或許會在表面殘留,如果影響了實驗結果,那么你僅僅是尋找原因就夠受的,結果就是事倍功半得不償失.據我的經驗只要你有足夠的皿,用鉻酸泡還是最徹底的清洗方法,而且只要注意保護自己的皮膚,清洗還是不那么困難的.
玻璃器皿的洗滌?
用洗試管的儀器
玻璃儀器洗滌的實驗注意事項
1.加熱或燒過的要冷卻后再洗 2.洗到水在壁面上能成股流下 3.擦凈 4.晾干