植物體細(xì)胞培養(yǎng)基操作

樓主好！！ 實(shí)驗(yàn)八 培養(yǎng)基的制備與滅菌 一、目的要求1. 掌握微生物實(shí)驗(yàn)室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2. 掌握培養(yǎng)基的配置方法。3. 掌握干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌的操作方法。二、基本原理 正確掌握培養(yǎng)基的配制方法是從事微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)工作的重要基礎(chǔ)。由于微生物種類及代謝類型的多樣性．因而用于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的種類也很多，它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養(yǎng)基的配制程序卻大致相同．例如器皿的準(zhǔn)備，培養(yǎng)基的配制與分裝，棉塞的制作，培養(yǎng)基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無菌檢查等基本環(huán)節(jié)大致相同。三、實(shí)驗(yàn)材料1. 藥品：待配各種培養(yǎng)基的組成成分、瓊脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。2. 儀器及玻璃器皿：天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、三角瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：藥匙、稱量紙、pH試紙、記號(hào)筆、棉花等。四、操作步驟（一）玻璃器皿的洗滌和包裝1．玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中．用毛刷刷洗，然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡，再用自來水及蒸餾水沖洗。洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。2．滅菌前玻璃器皿的包裝（1） 培養(yǎng)皿的包扎：培養(yǎng)皿由一蓋一底組成一套，可用報(bào)紙將幾套培養(yǎng)皿包成一包，或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內(nèi)，加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經(jīng)滅菌之后才能使用。（2）

圖8-1 移液管的包扎移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脫脂棉)，它的作用是避免外界及口中雜菌進(jìn)入管內(nèi)，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應(yīng)距管口約0.5cm左右，棉花自身長(zhǎng)度約1~1.5cm。塞棉花時(shí)．可用一外圍拉直的曲別針、將少許棉花塞入管口內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜，吹時(shí)以能通氣而又不使棉花滑下為準(zhǔn)。先將報(bào)紙裁成寬約5cm左右的長(zhǎng)紙條，然后將已塞好棉花的移液管尖端放在長(zhǎng)條報(bào)紙的一端，約成45℃角，折疊紙條包住尖端，用左手握住移液管身，有手將移液管壓緊．在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結(jié)，準(zhǔn)備滅菌。（二）液體及固體培養(yǎng)基的配制過程1．液體培養(yǎng)基配制1) 稱量：一般可用0.01g天平稱量配制培養(yǎng)基所需的各種藥品，先按培養(yǎng)基配方計(jì)算出各成分的用量．然后進(jìn)行準(zhǔn)確稱量。2) 溶解：將稱好的藥品置于一燒杯中，先加入少量水(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要可用自來水或蒸餾水)，用玻璃棒攪動(dòng)，加熱溶解。3) 定容：待全部藥品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需體積。如某種藥品用量太少時(shí)，可預(yù)先配成較濃溶液，然后按比例吸取一定體積溶液，加入至培養(yǎng)基中。4) 調(diào)pH：一般用pH試紙測(cè)定培養(yǎng)基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙，然后用鑷子夾取此段pH試紙，在培養(yǎng)基中蘸一下，觀看其pH范圍，如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時(shí)，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)pH時(shí)，應(yīng)逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌，并不時(shí)用pH試紙測(cè)試，直至達(dá)到所需pH為止。5) 過濾：用濾紙或多層紗布過濾培養(yǎng)基。一般無特殊要求時(shí)，此步可省去。2．固體培養(yǎng)基的配制 配制固體培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂(1.5~2％)加入，并用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化，最后補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去水分。（三）培養(yǎng)基的分裝 根據(jù)不同需要，可將已配好培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi)，分裝時(shí)注意不要使培養(yǎng)基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培養(yǎng)基沾污管口或瓶口時(shí)，可用鑷子夾一小塊脫脂棉，擦去管口或瓶口的培養(yǎng)基，并將脫脂棉棄去。1．試管的分裝取一個(gè)玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下連一根橡皮管，橡皮管下端再與另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一彈簧夾。分裝時(shí)，用左手拿住空試管中部，并將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內(nèi)，以右手拇指及食指開放彈簧夾，中指及無名指夾佐玻璃管嘴，使培養(yǎng)基直接流入試管內(nèi)。裝入試管培養(yǎng)基的量視試管大小及需要而定，若所用試管大小為15×150 mm時(shí)，液體培養(yǎng)基可分裝至試管高度1／4左有為宜；如分裝固體或半固體培養(yǎng)基時(shí)，在瓊脂完全融化后，應(yīng)趁熱分裝于試管中。用于制作斜面的固體培養(yǎng)基的分裝量為管高1／5(約3—4mI)，半固體培養(yǎng)基分裝量為管高的1／3為宜。2．三角瓶的分裝圖8-2培養(yǎng)基的分裝 用于振蕩培養(yǎng)微生物時(shí)，可在250 m1三角瓶中加入50 m1的液體培養(yǎng)基；若用于制作平板培養(yǎng)基用時(shí)，可在250 m1三角瓶中加入150ml培養(yǎng)基，然后再加入3g瓊脂粉(按2％計(jì)算)，滅菌時(shí)瓶中瓊脂粉同時(shí)被融化。（四）棉塞的制作及試管、三角瓶的包扎 為了培養(yǎng)好氣性微生物，需提供優(yōu)良通氣條件，同時(shí)為防止雜菌污染，則必須對(duì)通入試管或三角瓶?jī)?nèi)空氣預(yù)先進(jìn)行過濾除菌。通常方法是在試管及三角瓶口加上棉花塞等。1．試管棉塞的制作制棉塞時(shí)，應(yīng)選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成的團(tuán)孔上，用右手食指將棉花從中央壓入團(tuán)孔中制成棉塞．然后直接壓入試管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊卷塞法制作棉塞。制作的棉塞應(yīng)緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準(zhǔn)。棉塞的2／3在試管內(nèi)，1／3在試管外。目前也有采用硅膠塞代替棉塞直接蓋在試管口上。將裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱及配制日期，滅菌待用。

圖8-3 棉塞的制作

圖8-4 正確與不正確的棉塞1.金屬塞 2正確 3、4不正確 2．三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時(shí)為了進(jìn)行液體振蕩培養(yǎng)加大通氣量，則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅膠塞直接蓋在瓶口上。在裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或包扎八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上，再包上一層牛皮紙并用線繩捆好，滅菌待用。（五）培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基經(jīng)分裝包扎后，應(yīng)立即按配制方法規(guī)定的滅菌條件進(jìn)行進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。（六）斜面和平板的制作1．斜面的制作將已滅菌裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管，趁熱置于木棒或玻棒上，使成適當(dāng)斜度，凝固后即成斜面。斜面長(zhǎng)度不超過試管長(zhǎng)度l／2為宜。如制作半團(tuán)體或固體深層培養(yǎng)基時(shí)，滅菌后則應(yīng)垂直放置至凝固。2．平板的制作將裝在三角瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基融化后，待冷至50℃左右傾入無菌培養(yǎng)皿中。溫度過高時(shí)，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低于50℃，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應(yīng)在火旁進(jìn)行，左手拿培養(yǎng)皿，右手拿三角瓶的底部或試管，左手同時(shí)用小指和手掌將棉塞打開，灼燒瓶口，用左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，傾入10~15mL培養(yǎng)基，迅速蓋好皿蓋，置于桌上，輕輕旋轉(zhuǎn)平皿，使培養(yǎng)基均勻分布于整個(gè)平皿中，冷凝后即成平板。（七）培養(yǎng)基的滅菌檢查滅菌后的培養(yǎng)基，一般需進(jìn)行無菌檢查。最好取出1~2管(瓶)，置于37℃溫箱中培養(yǎng)1~2天，確定無菌后方可使用。（八）無菌水的制備在每個(gè)250mL的三角瓶?jī)?nèi)裝100mL的蒸餾水并塞上棉塞或硅膠塞。在每支試管內(nèi)裝4.5mL蒸餾水，塞上棉塞或硅膠塞。再在棉塞上包上一張牛皮紙，高壓蒸汽滅菌。0.1MPa滅菌20~30min。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1. 根據(jù)要求清洗各種玻璃器皿，并進(jìn)行包扎。2. 根據(jù)要求配制各種培養(yǎng)基。3. 用電熱鼓風(fēng)干燥箱對(duì)玻璃器皿進(jìn)行干熱滅菌。4. 用高壓蒸汽滅菌鍋對(duì)所配各培養(yǎng)基滅菌。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1. 簡(jiǎn)述移液管和培養(yǎng)皿的包扎注意事項(xiàng)。2. 簡(jiǎn)述配制培養(yǎng)基的基本步驟及注意事項(xiàng)。3. 為什么微生物實(shí)驗(yàn)室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花，再用報(bào)紙包起來，經(jīng)高壓蒸汽滅菌后才能使用?4. 為什么微生物實(shí)驗(yàn)室所用的三角瓶口或試管口都要塞上棉塞（硅膠塞）才能使用？5. 配制培養(yǎng)基時(shí)為什么要調(diào)節(jié)pH？6. 高壓蒸汽滅菌為什么比干熱滅菌要求溫度低、時(shí)間短？ 附錄 滅菌技術(shù)一、目的要求了解消毒和滅菌的原理，并掌握各種滅菌方法的操作步驟。二、實(shí)驗(yàn)材料1. 儀器或其他用具：上述包扎的培養(yǎng)皿、試管、移液管等，電熱鼓風(fēng)干燥箱，高壓蒸汽滅菌鍋，微孔濾膜過濾器，0.22μm濾膜，注射器，鑷子，玻璃涂棒。2. 培養(yǎng)基：上述配制的培養(yǎng)基及生理鹽水三、基本原理在微生物實(shí)驗(yàn)中，需要進(jìn)行純培養(yǎng)，不能有任何雜菌污染，因此必須對(duì)所用器材、培養(yǎng)基和工作場(chǎng)所進(jìn)行滅菌和消毒。滅菌是指殺死一定環(huán)境中的所有微生物，包括微生物的營(yíng)養(yǎng)體、芽孢和孢子。實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法包括直接灼燒、恒溫干燥箱滅菌、高壓蒸汽滅菌、間歇滅菌、煮沸滅菌等方法。這些方法的基本原理是通過加熱使微生物體內(nèi)蛋白質(zhì)凝固變性，從而達(dá)到滅菌的目的。四、操作步驟（一）干熱滅菌法干熱滅菌是在電熱干燥箱內(nèi)利用高溫干燥空氣（160℃~170℃）進(jìn)行滅菌，它是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌目的。此法適用于玻璃器皿如移液管、試管和培養(yǎng)皿的滅菌。培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品不能采用干熱滅菌。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160℃~170℃），時(shí)間長(zhǎng)（1~2h）。但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會(huì)燒焦，甚至引起燃燒。干熱滅菌使用的是電熱干燥箱（干燥箱）。具體操作步驟如下：1. 裝入待滅菌物品：將包好的待滅菌物品放入電熱干燥箱內(nèi)，關(guān)好箱門。堆積時(shí)要留有空隙，物品不要擺放得太擠，以免妨礙空氣流通，滅菌物品不要接觸電熱干燥箱內(nèi)壁的鐵板、溫度探頭，以防包裝紙烤焦起火。2. 升溫：接通電源，打開開關(guān)，適當(dāng)打開電熱干燥箱頂部的排氣孔，旋動(dòng)恒溫調(diào)節(jié)器，使溫度逐步上升。當(dāng)溫度升至100℃時(shí)，關(guān)閉排氣孔。在升溫過程中，如果紅燈熄滅，綠燈亮，表示電熱干燥箱內(nèi)停止加溫，此時(shí)如果還未達(dá)到所需的160℃~170℃，則需要轉(zhuǎn)動(dòng)溫度調(diào)節(jié)器使紅燈亮，如此反復(fù)調(diào)節(jié)，直至達(dá)到所需的溫度。3. 恒溫：當(dāng)溫度升到160℃~170℃時(shí)，借助恒溫調(diào)節(jié)器的自動(dòng)控制，保持此溫度2h。干熱滅菌過程中，嚴(yán)防恒溫調(diào)節(jié)的自動(dòng)控制失靈而造成安全事故。4. 降溫：切斷電源，自然降溫。5. 開箱取物：待電熱干燥箱內(nèi)溫度降到60℃以下后，才能打開箱門，取出滅菌物品。同時(shí)，應(yīng)將溫度調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)到零點(diǎn)，并打開排氣孔。電熱干燥箱內(nèi)溫度未降到60℃以前，切勿自行打開箱門，以免驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。（二）高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，在一定的壓力下保持15~30分鐘進(jìn)行滅菌。此法適用于培養(yǎng)基、無菌水、工作服等物品的滅菌，也可用于玻璃器皿的滅菌。將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋夾套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中排盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，獲得高于100℃的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。在相同的溫度下，濕熱滅菌的效果好于干熱滅菌。有三點(diǎn)原因：在濕熱滅菌中菌體吸收水分，蛋白質(zhì)容易凝固變性，蛋白質(zhì)隨著含水量的增加，所需凝固溫度降低；濕熱滅菌中蒸汽的穿透力比干燥空氣大；蒸汽在被滅菌物體表面凝結(jié)，釋放出大量的汽化潛熱，能迅速提高滅菌物體表面的溫度，從而增加滅菌效力。實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌鍋有非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋和自控式滅菌鍋，其結(jié)構(gòu)和工作原理是相同的。本實(shí)驗(yàn)介紹的是非自控手提式高壓蒸汽滅菌鍋，自控式滅菌鍋的使用可參考廠家說明書。具體操作步驟如下：1. 加水：首先將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面沒過加熱蛇管，與三角擱架相平為宜。切勿忘記檢查水位，加水量過少，滅菌鍋會(huì)發(fā)生燒干引起炸裂事故。2. 裝料：放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌的物品。注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。裝有培養(yǎng)基的容器放置時(shí)要防止液體溢出，三角瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包扎的紙而透入棉塞。3. 加蓋：將蓋上與排氣孔相連的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)，擺正鍋蓋，對(duì)齊螺口，然后以對(duì)稱方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣，并打開排氣閥。4. 排氣：打開電源加熱滅菌鍋，將水煮沸，使鍋內(nèi)的冷空氣和水蒸汽一起從排氣孔中排出。一般認(rèn)為當(dāng)排出的氣流很強(qiáng)并有噓聲時(shí)，表明鍋內(nèi)的空氣已排盡，沸騰后約需5分鐘。5. 升壓：冷空氣完全排盡后，關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，鍋內(nèi)壓力開始上升。6. 保壓：當(dāng)壓力表指針達(dá)到所需壓力時(shí)，控制電源，開始計(jì)時(shí)并維持壓力至所需的時(shí)間。如本實(shí)驗(yàn)中采用0.1Mpa，121.5℃，20分鐘滅菌。滅菌的主要因素是溫度而不是壓力，因此鍋內(nèi)的冷空氣必須完全排盡后，才能關(guān)閉排氣閥，維持所需壓力。7. 降壓：達(dá)到滅菌所需的時(shí)間后，切斷電源，讓滅菌鍋溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至“0”后，方可打開排氣閥，排盡余下的蒸汽，旋松螺栓，打開鍋蓋，取出滅菌物品，倒掉鍋內(nèi)剩水。壓力一定要降到“0”后，才能打開排氣閥，開蓋取物。否則就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基或試劑由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼傷操作者。8. 無菌檢查：將已滅菌的培養(yǎng)基放入37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，檢查無雜菌生長(zhǎng)后，即可使用。 （三）過濾除菌有些物質(zhì)，如抗生素、血清、維生素、糖溶液等采用加熱滅菌法時(shí)，容易受熱分解而被破壞，因而要采用過濾除菌法。過濾除菌是通過機(jī)械作用濾去液體或氣體中細(xì)菌的方法，該方法最大的優(yōu)點(diǎn)是不破壞溶液中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。過濾除菌法除實(shí)驗(yàn)室用于溶液、試劑的除菌外，在微生物工作中使用的凈化工作臺(tái)也是根據(jù)過濾除菌的原理設(shè)計(jì)的，可根據(jù)不同的需要來選用不同的濾器和濾板材料。應(yīng)用最廣泛的過濾器種類有：1. 微孔濾膜過濾器：是一種新型過濾器，它由上下二個(gè)分別具有出口和入口連接裝置的塑料盒組成，出口處可連接針頭，入口處可連接針筒，使用時(shí)將濾膜裝入兩塑料盒之間，旋緊盒蓋，當(dāng)溶液從針筒注入濾器時(shí)，各種微生物被阻留在微孔濾膜上面，而液體和小分子物質(zhì)通過濾膜，從而達(dá)到除菌的目的。其濾膜是由硝酸纖維素、醋酸纖維素等制成的薄膜，有孔徑大小不同的多種規(guī)格（如0.1μm、0.22μm、0.3μm、0.45μm等），實(shí)驗(yàn)室中用于除菌的微孔濾膜孔徑一般為0.22μm。根據(jù)待除菌溶液量的多少，可選用不同大小的濾器。該濾器的優(yōu)點(diǎn)是吸附性小，即溶液中的物質(zhì)損耗少，過濾速度快，每張濾膜只使用1次，不用清洗。2. 蔡氏（Seitz）過濾器：是一種金屬制成的過濾漏斗，其過濾部分是一種用石棉纖維和其他填充物壓制成的片狀結(jié)構(gòu)。溶液中的細(xì)菌通過石棉纖維的吸附和過濾而被去除，但對(duì)溶液中其他物質(zhì)的吸附性也大，每張纖維板只能使用1次。3. 玻璃過濾器：是一種玻璃制成的過濾漏斗，其過濾部分是由細(xì)玻璃粉燒結(jié)成的板狀構(gòu)造。玻璃濾器的規(guī)格很多，5號(hào)（孔徑2~5μm）和6號(hào)（孔徑<2μm）適用于過濾細(xì)菌，其優(yōu)點(diǎn)是吸附量少，但每次使用后要洗凈再用。本實(shí)驗(yàn)采用微孔濾膜過濾器進(jìn)行過濾除菌，具體操作步驟如下：1. 組裝、滅菌：將0.22

化學(xué)：玻璃儀器的洗滌

玻璃儀器內(nèi)任何一點(diǎn)沾污，都可能影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，玻璃儀器要始終保持干燥潔凈，每次實(shí)驗(yàn)前要檢查是否潔凈，實(shí)驗(yàn)后要及時(shí)清洗、晾干。

對(duì)一般實(shí)驗(yàn)來說要求玻璃儀器洗滌后，其內(nèi)壁附著的水很均勻，既不聚成水滴，也不成股流下，晾干后不留水痕即可。

在洗滌之前要先了解它是被什么污物所污染，再?zèng)Q定采用相應(yīng)的洗滌方

法。儀器用畢應(yīng)立即清洗，一般可依照：傾去廢物——冷卻——用水沖洗——刷洗——用水沖洗的順序進(jìn)行。如果儀器內(nèi)壁附著有不易涮掉的物質(zhì)，要使用試管刷(或燒瓶刷)。使用試管刷在盛水的試管里轉(zhuǎn)動(dòng)或上下移動(dòng)時(shí)，不可用力過猛，以防戳破管底。最好是選準(zhǔn)手指捏持試管刷柄的部位，使試管刷的鐵絲端碰不到管底為好。

若儀器內(nèi)壁附著不溶于水的堿、碳酸鹽、堿性氧化物等物質(zhì)，可先用少量稀鹽酸溶解，再反復(fù)用水沖洗。若附著少量油污，就會(huì)掛附水珠，可用適合的刷子蘸少量洗衣粉(或洗潔精)刷洗，刷凈后再反復(fù)用水沖洗。

洗凈的儀器可倒置在不被碰撞的地方(如將試管倒插在試管架上)晾干備用。

但是，注意：洗滌干凈的標(biāo)準(zhǔn)是：既不聚成水滴，也不成股流下

注意的分配實(shí)驗(yàn)

1、常用玻璃儀器的準(zhǔn)備

制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細(xì)吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈，晾干后備用。

（1）平皿用紙或布包好，或裝在金屬盒內(nèi)，于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干，備用。

（2）試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，再用布或報(bào)紙包扎好，121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干，備用。

（3）吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽內(nèi)的氣體污染），然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內(nèi)，于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干，備用。其他玻璃器皿均應(yīng)按上法處理，也應(yīng)裝金屬筒內(nèi)160℃干熱滅菌2h后，備用。

2、培養(yǎng)基的制備及儲(chǔ)存

（1）溶化：一般應(yīng)放在玻璃器皿或搪瓷齊內(nèi)。加入蒸餾水，隔水加熱以促其溶解，加熱時(shí)應(yīng)經(jīng)常攪拌，防止焦結(jié)，待其溶解后補(bǔ)足水分。

在使用干燥培養(yǎng)基時(shí)，先將蒸餾水按定量加入容器中，然后稱取一定量培養(yǎng)基干粉放入水中，靜置10—15min，攪拌，振蕩，或延長(zhǎng)時(shí)間以促進(jìn)溶解，一般不要熱，必要時(shí)加熱，但時(shí)間不宜過長(zhǎng)，溫度不宜過高，避免某些營(yíng)養(yǎng)成分被破壞。

（2）校正酸堿度（調(diào)節(jié)pH）：培養(yǎng)基必須有適當(dāng)?shù)膒H。因此測(cè)定pH是培養(yǎng)基配制過程中的重要步驟之一，測(cè)定pH的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25士2℃。調(diào)節(jié)pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。當(dāng)調(diào)節(jié)緩沖液的pH時(shí)，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液。滅菌后的pH會(huì)比滅菌前的pH升高或降低，一般高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH會(huì)比最終pH調(diào)高0.2左右，滅菌后基本合適。因此對(duì)培養(yǎng)基、緩沖液、試劑在滅菌前后的pH均進(jìn)行測(cè)定，并記下每次pH的測(cè)定結(jié)果，有助于積累數(shù)據(jù)考察每種培養(yǎng)基、緩沖液、試劑對(duì)滅菌程序的耐受性，從而指導(dǎo)滅菌前pH的調(diào)節(jié)。干燥培養(yǎng)基一般已校正過pH，用時(shí)也必須再驗(yàn)證。測(cè)定時(shí)，一般用指示劑滴入培養(yǎng)基觀察其顏色的變化，或用pH計(jì)校正，如與所需pH不符，可用以上的酸或堿液加以校正。調(diào)整pH后要加熱過濾，使培養(yǎng)基澄清。

（3）培養(yǎng)基的分裝：大批量配制時(shí)使用的自動(dòng)分配器須經(jīng)校準(zhǔn)和確認(rèn)。每次使用前后，均要對(duì)分配器的管道系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，在分裝無菌培養(yǎng)基前，則要采用無菌硅膠管。

固體培養(yǎng)基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中，高壓滅菌后根據(jù)需要分裝平皿或試管。

平皿：傾注平皿，應(yīng)在無菌室中放置3—4h，如用塑料平皿須在35℃培養(yǎng)箱 中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發(fā)。

斜面：制備低層斜面分裝于試管，約占容積1/5，滅菌后趁熱斜放在細(xì)玻璃棒和木桿上，使成斜度，分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養(yǎng)基，如沾有培養(yǎng)基應(yīng)用布抹去，以避免污染。

高層斜面：制備高層斜面分裝于試管，約占試管容積的1/3，滅菌后趁熱放置成高層短斜面，待其凝固后應(yīng)用。

分裝好的培養(yǎng)基或緩沖液等及時(shí)密封后必須在配制當(dāng)天（2h內(nèi)最佳）進(jìn)行滅菌處理。液體、半固體培養(yǎng)基一般在高壓滅前分裝，約裝試管容積的1/3，在滅菌后還要加其他成分的液體、半固體培養(yǎng)基，滅菌后再分裝于滅菌試管或錐形瓶中。

培養(yǎng)基的滅菌：培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌，各種培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和壓力，按其成分不同而定。普通培養(yǎng)基采用121℃、103.42kPa滅菌15min，但容器和裝量較大時(shí)，應(yīng)延長(zhǎng)至20min。含糖培養(yǎng)基115℃、68.85kPa滅菌30min。含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動(dòng)蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，連續(xù)3d，間歇滅菌。血清或組織液，采用低熱56—58水浴1h，連續(xù)5—6d滅菌，一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等，可用細(xì)菌過濾器，過濾除菌。高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，必須逐漸加熱，徹底排除滅菌器內(nèi)的空氣，再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時(shí)間，達(dá)到全部殺滅微生物。以上的滅菌時(shí)間和溫度要經(jīng)過驗(yàn)證確認(rèn)，如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時(shí)宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。

某同學(xué)進(jìn)行玻璃器皿的滅菌,步驟為清洗 – 煮沸 – 高溫烘干滅菌,但是滅過菌后發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了染菌的現(xiàn)象,通過鏡檢發(fā)

高溫滅菌是可以的,但是你的玻璃器皿肯定沒有包裝物,這樣,滅菌好的玻璃器皿從烘箱中取出后,有染菌的現(xiàn)象.建議試試那種紙耐高溫(你對(duì)器皿滅菌的溫度即可),把玻璃器皿包裝上,再去滅菌.另外,條件允許,采用蒸汽滅菌,但也要有包裝!

玻璃器皿的清洗,包扎,滅菌時(shí)容易出現(xiàn)的問題

請(qǐng)參考:http://wk.baidu.com/view/7edfd029192e45361166f501?pcf=2#page/1/1444698838406

如何清洗微生物實(shí)驗(yàn)室的玻璃器皿

1．新玻璃器皿的洗滌方法

新購置的玻璃器皿含游離堿較多，應(yīng)在酸溶液內(nèi)先浸泡數(shù)小時(shí)。酸溶液一般用2％的鹽酸或洗滌液（見本小節(jié)“3”）。浸泡后用自來水沖洗干凈。

2．使用過的玻璃器皿的洗滌方法

(1)試管、培養(yǎng)皿、三角燒瓶、燒杯等可用瓶刷或海綿沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗滌劑刷洗，然后用自來水充分沖洗干凈。熱的肥皂水去污能力更強(qiáng)，可有效地洗去器皿上的油污。洗衣粉和去污粉較難沖洗干凈而常在器壁上附有一層微小粒子，故要用水多次甚至10次以上充分沖洗，或可用稀鹽酸搖洗一次，再用水沖洗，然后倒置于鐵絲框內(nèi)或有空心格子的木架（圖Ⅰ-10）上，在室內(nèi)晾干。急用時(shí)可盛于框內(nèi)或搪瓷盤上，放烘箱烘干。

玻璃器皿經(jīng)洗滌后，若內(nèi)壁的水是均勻分布成一薄層，表示油垢完全洗凈，若掛有水珠，則還需用洗滌液浸泡數(shù)小時(shí)，然后再用自來水充分沖洗。

裝有固體培養(yǎng)基的器皿應(yīng)先將其刮去，然后洗滌。帶菌的器皿在洗滌前先浸在2％煤酚皂溶液（來蘇爾）或0．25％新潔爾滅消毒液內(nèi)24小時(shí)或煮沸半小時(shí)，再用上法洗滌。帶病原菌的培養(yǎng)物最好先行高壓蒸汽滅菌，然后將培養(yǎng)物倒去，再進(jìn)行洗滌。

盛放一般培養(yǎng)基用的器皿經(jīng)上法洗滌后，即可使用，若需精確配制化學(xué)藥品，或做科研用的精確實(shí)驗(yàn)，要求自來水沖洗干凈后，再用蒸餾水淋洗三次，晾干或烘干后備用。

(2)玻璃吸管吸過血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管（包括毛細(xì)吸管），使用后應(yīng)立即投入盛有自來水的量筒或標(biāo)本瓶?jī)?nèi)，免得干燥后難以沖洗干凈。量筒或標(biāo)本瓶底部應(yīng)墊以脫脂棉花，否則吸管投入時(shí)容易破損。待實(shí)驗(yàn)完畢，再集中沖洗。若吸管頂部塞有棉花，則沖洗前先將吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，用水將棉花沖出，然后再裝入吸管自動(dòng)洗滌器內(nèi)沖洗，沒有吸管自動(dòng)洗滌器的實(shí)驗(yàn)室可用沖出棉花的方法多沖洗片刻。必要時(shí)再用蒸餾水淋洗。洗凈后，放搪瓷盤中晾干，若要加速干燥，可放烘箱內(nèi)烘干。

吸過含有微生物培養(yǎng)物的吸管亦應(yīng)立即投入盛有2％煤酚皂溶液或0．25％新潔爾滅消毒液的量筒或標(biāo)本瓶?jī)?nèi)，24小時(shí)后方可取出沖洗。

吸管的內(nèi)壁如果有油垢，同樣應(yīng)先在洗滌液內(nèi)浸泡數(shù)小時(shí)，然后再行沖洗。

(3)載玻片與蓋玻片用過的載玻片與蓋玻片如滴有香柏油，要先用皺紋紙擦去或浸在二甲苯內(nèi)搖晃幾次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10分鐘，用軟布或脫脂棉花擦試，立即用自來水沖洗，然后在稀洗滌液中浸泡0．5—2小時(shí)，自來水沖去洗滌液，最后用蒸餾水換洗數(shù)次，待干后浸于95％酒精中保存?zhèn)溆谩Ｊ褂脮r(shí)在火焰上燒去酒精。用此法洗滌和保存的載玻片和蓋玻片清潔透亮，沒有水珠。

檢查過活菌的載玻片或蓋玻片應(yīng)先在2％煤酚皂溶液或0．25％新潔爾滅溶液中浸泡24小時(shí)，然后按上法洗滌與保存。

科研實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備基本常識(shí)

樓主你好：

（一）實(shí)驗(yàn)玻璃器皿的洗滌

分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用玻璃容器和瓷器，用不干凈的容器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，往往由于污物和雜質(zhì)的存在而得不到準(zhǔn)確的結(jié)果。所以容器應(yīng)該保證干凈。

洗滌容器的方法很多，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求，污物的性質(zhì)和玷污的程度加以選擇。

一般來說，附著在儀器上的污物有塵土和其他不溶性物質(zhì)、可溶性物質(zhì)、有機(jī)物質(zhì)及油污等。針對(duì)這些情況，可采用下列方法：

①用水刷洗：用自來水和毛刷刷洗容器上附著的塵土和水溶物。

② 用去污粉（或洗滌劑）和毛刷刷洗容器上附著的油污和有機(jī)物質(zhì)。若仍洗不干凈，可用熱堿液洗。容量?jī)x器不能用去污粉和毛刷刷洗，以免磨損器壁，使體積發(fā)生變化。

③ 用還原劑洗去氧化劑如二氧化錳。

④ 進(jìn)行定量分析實(shí)驗(yàn)時(shí)，即使少量雜質(zhì)也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。這時(shí)可用洗液清洗容量?jī)x器。洗液是重鉻酸鉀在濃硫酸中的飽和溶液。（5g粗重鉻酸鉀溶于10mL熱水中，稍冷，在攪拌下慢慢加入100mL濃硫酸中就得到鉻酸洗液，簡(jiǎn)稱洗液）。

使用洗液時(shí)要注意以下幾點(diǎn)：

① 使用洗液前最好先用水或去污粉將容器洗一下。

② 使用洗液前應(yīng)盡量把容器內(nèi)的水去掉，以免將洗液稀釋。

③ 洗液用后應(yīng)倒入原瓶?jī)?nèi)，可重復(fù)使用。

④ 不要用洗液去洗滌具有還原性的污物（如某些有機(jī)物），這些物質(zhì)能把洗液中的重鉻酸鉀還原為硫酸鉻（洗液的顏色則由原來的深棕色變?yōu)榫G色）。已變?yōu)榫G色的洗液不能繼續(xù)使用。

⑤ 洗液具有很強(qiáng)的腐蝕性，會(huì)灼傷皮膚和破壞衣物。如果不慎將洗液灑在皮膚、衣物和實(shí)驗(yàn)桌上，應(yīng)立即用水沖洗。

⑥ 因重鉻酸鉀嚴(yán)重污染環(huán)境，應(yīng)盡量少用洗液。用上述方法洗滌后的容器還要用水洗去洗滌劑。并用蒸餾水再洗滌三次。

洗滌容器時(shí)應(yīng)符合少量（每次用少量的洗滌劑）多次的原則。既節(jié)約，又提高了效率。已洗凈的容器壁上，不應(yīng)附著不溶物或油污。這樣的器壁可以被水完全潤(rùn)濕。檢查是否洗凈時(shí)，將容器倒轉(zhuǎn)過來，水即順著器壁流下，器壁上只留下一層既薄又均勻的水膜，而不應(yīng)有水珠。

（二）試劑及其取用方法

1.試劑的分類

根據(jù)化學(xué)試劑的純度，按雜質(zhì)含量的多少，國內(nèi)將化學(xué)試劑分為四級(jí)：

一級(jí)試劑（優(yōu)級(jí)純?cè)噭┩ǔＳ肎.R表示。

二級(jí)試劑（分析純?cè)噭┩ǔＳ肁.R表示。

三級(jí)試劑（化學(xué)純）通常用C.P表示。

四級(jí)試劑（實(shí)驗(yàn)或工業(yè)試劑）通常用L.R表示。

生物試劑 通常用B.R或C.R表示。

此外，根據(jù)特殊的工作目的，還有一些特殊的純度標(biāo)準(zhǔn)。例如光譜純、螢光純、半導(dǎo)體純等。取用時(shí)應(yīng)按不同的實(shí)驗(yàn)要求選用不同規(guī)格的試劑。例如一般無機(jī)實(shí)驗(yàn)用三級(jí)或四級(jí)試劑即可，分析實(shí)驗(yàn)則需取用純度較高的二級(jí)甚至一級(jí)試劑。更多質(zhì)量檢測(cè)、分析測(cè)試、化學(xué)計(jì)量、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)技術(shù)資料請(qǐng)參考中檢所標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品 www.rmhot.com

2.試劑的包裝

固體試劑一般裝在帶膠木塞的廣口瓶中，液體試劑則盛在細(xì)口瓶中（或滴瓶中），見光易分解的試劑（如硝酸銀）應(yīng)裝在棕色瓶中，每一種試劑都貼有標(biāo)簽以表明試劑的名稱、濃度、純度。（實(shí)驗(yàn)室分裝時(shí)，固體只標(biāo)明試劑名稱，液體還須注名明濃度）。

3.試劑的取用

固體粉末試劑可用潔凈的牛角勺取用。液體試劑常用量筒量取。

為了達(dá)到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，取用試劑時(shí)應(yīng)遵守以下規(guī)則，以保證試劑不受污染和不變質(zhì)：

(1)試劑不能與手接觸。

(2)要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，絕對(duì)不準(zhǔn)用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種

試劑。取完一種試劑后，應(yīng)將工具洗凈（藥勺要擦干）后，方可取用另一種試劑。

(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后

將瓶放回原處。

(4)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶?jī)?nèi)。

（三）滴定分析

1 滴定分析對(duì)化學(xué)反應(yīng)的要求

滴定分析法是以化學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)的，選擇分析方法和實(shí)驗(yàn)條件都要以此為出發(fā)點(diǎn)。可以進(jìn)行的化學(xué)反應(yīng)雖然很多，但能作為滴定分析用的反應(yīng)，一定得滿足下列要求。

（1）反應(yīng)必須定量地完成

化學(xué)反應(yīng)按一定的反應(yīng)方程式進(jìn)行，即反應(yīng)具有確定的化學(xué)計(jì)量關(guān)系，并且進(jìn)行得相當(dāng)完全（通常要求達(dá)到99.9%左右），不存在副反應(yīng)。只有這樣才能進(jìn)行定量計(jì)算。

（2）應(yīng)必須迅速地完成

整個(gè)滴定過程一定要在很短的時(shí)間內(nèi)完成，如果反應(yīng)速度比較慢，可以用加熱或加入催化劑等措施來加快反應(yīng)速度。

（3）可用指示劑或儀器分析法確定反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量點(diǎn)

有的反應(yīng)達(dá)到化學(xué)計(jì)量點(diǎn)，靠滴定劑本生就可以確定。例如用KMnO4滴定還原劑時(shí)，過量一滴KMnO4溶液就會(huì)使無色溶液顯出淡紅色。但這樣的反應(yīng)是不多的，通常需借助指示劑的顏色變化來指示化學(xué)計(jì)量點(diǎn)。有時(shí)也利用溶液受電能或光能作用所產(chǎn)生的性質(zhì)變化來指示化學(xué)計(jì)量點(diǎn)。

在細(xì)胞培養(yǎng)中,玻璃器皿用鉻酸洗液洗消到底是否是必要的?如果清洗干凈后直接高壓滅菌可以嗎?

你要保證你清洗的干凈,用洗滌靈.蒸餾水沖后水不是呈柱狀流.如果你之前所有人都是用鉻酸洗液清洗的,我勸你還是依照大家的方法比較穩(wěn)妥,因?yàn)樵谄髅笊蠚埩舻牟粌H僅是菌,只通過滅菌只能將菌殺死,而其他成分或許會(huì)在表面殘留,如果影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果,那么你僅僅是尋找原因就夠受的,結(jié)果就是事倍功半得不償失.據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)只要你有足夠的皿,用鉻酸泡還是最徹底的清洗方法,而且只要注意保護(hù)自己的皮膚,清洗還是不那么困難的.

玻璃器皿的洗滌?

用洗試管的儀器

玻璃儀器洗滌的實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.加熱或燒過的要冷卻后再洗 2.洗到水在壁面上能成股流下 3.擦凈 4.晾干