石蠟切片的制作方法?
腸道的石蠟切片的制作
(1) 取材:用鋒利的刀切取羅非魚的一小段前腸(據(jù)胃5cm左右位置的前腸),組織塊的規(guī)格為 3~5mm×3~5mm×10~15mm。
(2) 固定:采用Bouin氏固定液裝瓶固定,固定液用量一般為組織塊體積的10~20倍。
(3) 沖洗:固定12~24h后,將材料自固定液中取出后,在70%酒精中換洗幾次,可在酒精中加幾滴氨水至洗去黃色為止。
(4) 脫水:70%酒精(1h)→80%酒精(1h)→90%酒精(1h)→95%酒精(1h)→無水乙醇Ⅰ(1h)→無水乙醇Ⅱ(1h)
(5) 透明:無水乙醇與二甲苯溶液(1:1)(1h)→二甲苯Ⅰ(1h)→二甲苯Ⅱ
(1h)
(6) 浸蠟:浸蠟的全過程應在恒溫設(shè)備中進行,將恒溫箱調(diào)至58℃。
二甲苯與石蠟混合液(1:1)(1h)→石蠟Ⅰ(1h)→石蠟Ⅱ(1h)
浸蠟必須徹底,否則組織內(nèi)殘留透明劑會造成切片過程的困難和影響切片
的質(zhì)量。
(7) 包埋:在小紙盒內(nèi)注入溶化的石蠟,將已浸蠟的組織塊置入其內(nèi),使蠟塊迅速冷卻硬固,組織塊在蠟塊中可長期保存。
(8) 切片:包埋后的組織塊經(jīng)修整后,用切片機切成5~7μm的石蠟帶。
(9) 粘片:將組織石蠟帶在50攝氏度的溫水中展片,然后用經(jīng)1%HCl溶液處理干凈的載玻片撈片,組織帶即可粘在載玻片上。
(10) 烤片:將粘好的載玻片置于35℃左右的溫箱中烤干,待2~3小時后,即可取下編號。
(11) 蘇木精—伊紅染色:將烤干的片進行染色。
①脫蠟:將烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain。
②復水:將脫蠟后的切片移入100%酒精5min→95%酒精5min→85%酒精5min→70%酒精5min→蒸餾水5min
③HE染色顯示腸道黏膜上皮內(nèi)淋巴細胞:將蒸餾水洗滌后的切片移入Harris蘇木精液中,10min,使細胞核著色;用自來水洗去切片上殘余染液;用1%的鹽酸酒精分色3秒;用自來水浸洗3h,顯微鏡下觀察,直到胞核藍化為止;然后切片入曙紅溶液中染色5min,使細胞質(zhì)著色。經(jīng)95%酒精與100%酒精脫水,二甲苯透明后,中性樹膠封片。
④奧新蘭一沙黃染色顯示腸道內(nèi)肥大細胞:切片常規(guī)脫蠟下行至蒸餾水→奧新蘭一沙黃液染色15~20min→蒸餾水速洗,鏡檢→95%和100%酒精分色脫水1—2min→二甲苯透明→中性樹膠封片。
⑤阿利新蘭醋酸染色顯示腸道內(nèi)杯狀細胞:切片經(jīng)脫蠟下行入蒸餾水→阿利新蘭醋酸染色10min→蒸餾水洗→1%高碘酸水液氧化5min→蒸餾水略洗一Schiff試劑染色(37℃恒溫箱)30min→普通水洗3次→蒸餾水2min→Ehrlich蘇木精染色5min→95%酒精和100%酒精脫水→二甲苯透明,中性樹膠封片。
切片經(jīng)脫蠟下行入水:二甲苯(30 min)一二甲苯(10 min)一無水乙醇(5 min)一無水乙醇(5 min)一
95% 乙醇(5 min)一85%乙醇(5 min)一70% 乙醇(5 min)一流水沖洗(20 min)。人Ehrlich蘇木精染
色12 min,蒸餾水速洗。鹽酸酒精分色,鏡檢控制時間。入伊紅染色2 min,蒸餾水略洗。鹽酸酒精分色,鏡檢控制時間。經(jīng)95%酒精與無水酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。
阿利新蘭—番紅復合染色液的方法稱Scaba法
阿利新蘭—番紅分別染色的方法稱Spicer法
石蠟切片如何快速操作完成?
(一)應用范圍
(1)替代冷凍切片,在沒有條件制作冷凍切片的單位,用作術(shù)中診斷;
(2)快速診斷:適用于門診外地患者,1天可取報告。
(二)切片制作
(1) 將送檢的各類組織按《規(guī)范》(一)編號登記、眼觀、描述記錄后,用大頭針和羊皮紙包好,投入配制好的固定液燒杯內(nèi)5~10min(固定液配制:95%乙醉85ml,甲醛10ml,冰醋酸5ml);若組織較厚,可在預固定后修薄,重復固定;
(2)無水乙醇、丙酮脫水3~5min;
(3)浸蠟5min;
(4)常規(guī)石蠟包埋,或封固于預制好的蠟塊內(nèi);
(5)常規(guī)HE加溫染色。
(三)注意事項
(1) 制作快速石蠟切片全過程過程均加溫在65~72℃范圍內(nèi)操作,可用快速組織處理儀、或在恒溫水浴鍋或恒溫箱內(nèi)完成;
(2) 替代冷凍切片可隨到即做,一般在30min內(nèi)完成;若成批操作,則可根據(jù)標本的數(shù)量多少,酌情延長時間;
(3) 制作快速石蠟切片,操作人員必須經(jīng)過一段時間的訓練和摸索,在取得一定經(jīng)驗、技術(shù)較熟練能保證切片質(zhì)量后,方可受理對外服務,以把好質(zhì)量關(guān)
如何制作石蠟切片?
[1]請教丁老師如何制作皮膚的石蠟切片
一 皮膚組織標本制作及常用染色方法概述
皮膚組織標本常規(guī)以福爾馬林固定,石蠟包埋,蘇木素-伊紅(Hematoxylin eosin HE)染色。皮膚組織的制片及染色技術(shù)與普通病理相同:標本固定-水洗-硬化、脫水-透明-包埋-切片-染色。但皮膚組織亦有其自身特點,如表皮細胞層次多,纖維及脂肪組織豐富,在取材及固定方面有其特殊性,制片及染色過程也應注意其特點,以提高制片質(zhì)量。
二 取材
a取材要足夠大,應包括一小部分正常組織,以便與病理組織對照,因許多皮膚病的典型病變在真皮深層或皮下組織,故還應包括皮下組織,
b多數(shù)情況下應選擇充分發(fā)展的損害,早期損害常為非特異性,晚期損害的病變大都處于恢復或變性、壞死階段,充分發(fā)展的損害容易找到典型病變而明確診斷,還應盡量選擇損害的活動邊緣部分,中央部分可能病變已趨向于消退而找不出典型病變。對于水皰性、膿皰性以及含有病原體的損害應取早期損害,否則,若發(fā)生繼發(fā)性改變(如變性、再生或繼發(fā)性感染)可能隱蔽了重要病變的組織形態(tài),同時,很難辨別病變形成的過程,
c盡量避免切除腋窩或腹股溝等部位皮膚組織,因該處皮膚由于磨擦,搔抓等常有萎縮,
d如疑有血管性或血液性疾患,最好不要取下肢標本,因下肢常有血液停滯或其它肢端血管病,皮內(nèi)可能有含鐵血黃素沉著,
e對某些腫瘤,如角化棘皮瘤,Spitz痣等,應盡可能將腫瘤全部切除,若不能全部切除,則最好自腫瘤中心至邊緣取一楔形標本,以供組織學檢查。
三 固定
切下皮膚愈早固定愈好,夏天超過4小時,冬天超過24小時,標本體積就要收縮變形或發(fā)生自溶。常用固定液為10%中性福爾馬林,其總體積應為組織塊總體積的7~10倍,用10%福爾馬林固定小塊組織(1.5 cm×1.5 cm×0.2cm)數(shù)小時即可,時間稍長對制片影響不大,隨著溫度的增高可縮短固定時間,對固定時間過長的標本,可在制作切片時,用流水沖洗24小時,甚至48小時,以免影響染色效果。
四 脫水、包埋、切片及染色
皮膚組織常用酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋,切片厚度一般為5μm~7μm,與普通病理切片操作程序相同。HE染色法方便、經(jīng)濟,結(jié)果穩(wěn)定,95%以上的組織切片都可以在HE染色下作出診斷,是皮膚組織病理最常用的方法。
[2]http://www.pathology-home.com/html/pathology/20051207_1.asp
自己點進去看吧,太多了 復制不了
小鼠肝組織石蠟切片具體怎么做?
一般來說是要的,但也要根據(jù)具體實驗要求決定(比如你要觀察一些什么東西啦,對結(jié)構(gòu)的完整性要求有多高啦)甲醛能固定一般組織,但溶解肝糖和色素。
注意:1.材料必須新鮮,擱置時間過久則產(chǎn)生蛋白質(zhì)分解變性,導致細胞自溶及細菌的滋生,而不能反映組織活體時的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
2.固定液的種類很多,其對組織的硬化收縮程度以及組織內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、糖類等物質(zhì)的e799bee5baa6e79fa5e98193e4b893e5b19e31333239306636作用各不相同。例如純酒精可固定肝糖而能溶解脂肪,甲醛能固定一般組織,但溶解肝糖和色素。固定液可分為單一固定液及混合固定液。前者有甲醛(蟻醛、福爾馬林)、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、鋨酸(四氧化鋨)、重鉻酸鉀及苦味酸等,單一固定液不能固定細胞中的所有成分;混合固定液可以互補不足,常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液(配方見有關(guān)技術(shù)書籍)。
過程:
1.取材
2.固定
3.洗滌與脫水
4.透明
5.浸蠟與包埋
6.切片
7.貼片與烤片
8.切片脫蠟及水化
9.染色
10.切片脫水、透明和封片
切片刀的銳利與否、蠟塊硬度適當都直接影響切片質(zhì)量,可用熱水或冷水等方法適當改變蠟塊硬度。通常切片厚度為4~7微米,切出一片接一片的蠟帶,用毛筆輕托輕放在紙上。
小鼠脾臟石蠟切片如何制作
你碰對人了,正好我這些天在做假復層立方上皮的切片 其實切片很好做,最關(guān)鍵的就是你的切片機切出的薄厚怎么樣 下面我給你說說程序:1、取材與固定:
小鼠肺石蠟切片如何制作
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其實切片很好做,最關(guān)鍵的就是你的切片機切出的薄厚怎么樣
下面我給你說說程序:
1、取材與固定:?
從人或動物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質(zhì)變性凝固,以防止細胞死后的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu)。?
2、脫水透明:
一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出組織塊的中酒精,才能浸蠟包埋。
?3、浸蠟包埋:
將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中,放入溶蠟箱保溫。待石蠟完全浸入組織塊后進行包埋:先制備好容器(如折疊一小紙盒),倒入已溶化的石蠟,迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,才能在切片機上切成很薄的切片。
?4、切片與貼片:?
將包埋好的蠟塊固定于切片機上,切成薄片,一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恒溫箱中烘干。
?5、脫蠟染色:?
常用HE染色,以增加組織細胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異,利于觀察。蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿性染料,可將細胞核和細胞內(nèi)核糖體染成藍紫色,被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性。伊紅(Eosin,E)是一種酸性染料,能將細胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,最后入蒸餾水,就可染色。
HE染色過程是:?
①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。?
②酸水及氨水中分色,各數(shù)秒鐘。?
③流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。?
④入70%和90%酒精中脫水各10分鐘。?
⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。
?6、脫水透明:?
染色后的切片經(jīng)純酒精脫水,再經(jīng)二甲苯使切片透明。
?7、封固:?
將已透明的切片滴上加拿大樹膠,蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后,貼上標箋,切片標本就可使用
希望能幫的上你的忙啊
如何制作切片標本?
最為廣泛應用的方法:石蠟切片 不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu),也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領(lǐng)域的研究中。教學中,光鏡下觀察切片標本多數(shù)是石蠟切片法制備的。活的細胞或組織多為無色透明,各種組織間和細胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間均缺乏反差,在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出;組織離開機體后很快就會死亡和產(chǎn)生組織腐敗,失去原有正常結(jié)構(gòu),因此,組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞組織死亡,而能清晰辨認其形態(tài)結(jié)構(gòu)。
石蠟切片制作基本技術(shù) 石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標本需要數(shù)日,但標本可以長期保存使用,為永久性顯微玻片標本。
誰有組織切片的制作過程
一、制備顯微標本的切片62616964757a686964616fe4b893e5b19e31333330323262法
一石蠟包埋切片制作法
這是最常用的切片法。以石蠟作為組織的填充支持介質(zhì),將整塊組織加以包埋,最后凝固成均勻一致的固態(tài)結(jié)構(gòu)。用切片機制取極薄的切片。為了讓石蠟能浸入組織內(nèi)部,需將組織經(jīng)過脫水等處理。過程大致如下:
⑴固定:生物標本脫離機體或培養(yǎng)環(huán)境,細胞會發(fā)生自溶,腐敗分解。因此,需用固定劑處理,使蛋白質(zhì)凝固停止瀕死或死后變化。凡供永久保存的標本都需經(jīng)固定處理。
常用的固定劑是甲醛、乙醇等,能使蛋白質(zhì)凝固。還有由幾種試劑配成的固定液,例如Carnoy固定液,由無水酒精、氯仿、冰醋酸配成,固定力更快更強,不含水分,可避免水溶性物質(zhì)如糖原等在固定過程中損失。
⑵脫水:是將組織細胞所含水分除去。通常用乙醇(Alcohol,酒精),濃度遞升到 100%。此過程還使組織塊進一步硬化。
⑶透明:是用既能溶于純酒精又能融解石蠟的有機溶劑,將組織中的酒精取代,以便石蠟浸入。通常用二甲苯(xylene)為透明劑。
⑷浸蠟:在溫箱內(nèi)進行。已透明的組織塊放入加熱融解的石蠟中,讓石蠟浸透組織,作為支持介質(zhì)。
⑸包埋:將已浸蠟的組織塊放入熱融的包埋石蠟中,迅速冷凝,組織決便被蠟包埋。
⑹切片:用切片機。常用的切片機有輪轉(zhuǎn)式、平推式的。用輪轉(zhuǎn)式的易于切出連續(xù)切片。切片厚度隨制片目的而調(diào)整。教學標本厚度多是5~6μm。
⑺貼片烤干:石蠟切片在溫水上展平后,移在玻片上,烤干,即可供染色處理。染色后用樹膠、蓋坡片封固,可永久保存。
二冷凍切片法
冷凍切片法是借組織在低溫下,凍結(jié)變硬而達到符合切片要求。冷凍切片法需有冷凍切片機,或在普通切片上配制冷設(shè)施。恒冷切片機是高級冷凍切片設(shè)備。它有一個恒冷箱,標本致冷臺和切片機都裝在箱內(nèi)。恒冷箱的作用類似冰箱,可在一定范圍內(nèi)調(diào)整溫度,其結(jié)構(gòu)有利于保持箱內(nèi)恒定低溫,減少箱門打開時環(huán)境溫度的干擾。切片機的輪轉(zhuǎn)把手裝在箱外,便于操縱切片。
冷凍切片法的優(yōu)點是:在處理得當時,它可以最大限度地保持組織的新鮮狀態(tài)。并且,由于不需經(jīng)脫水、透明、浸蠟等過程中有機溶劑的處理,及濕箱浸蠟熱的影響,甚至可不經(jīng)固定。所以能很好地保存組織細胞的各種成分和酶的活性,因此在酶的組織化學研究中常用此切片法。
二、顯示標本結(jié)構(gòu)成分的染色法
一蘇木素伊紅染色法(HE染色法)
為最常用的染色法。該法應用于各種組織的染色,是組織學技術(shù)的基本方法,對任何液體固定的組織和各種包埋的切片均可使用,只是對不同包埋的切片法處理略有不同。下面簡介石蠟包埋切片的HE染色法。
1、脫蠟:石蠟切片的組織內(nèi)部充滿石蠟,不能使水溶性染液著色,因此在染色前必須首先用二甲苯將石蠟脫掉,共兩次。
2、下行入水:將已脫蠟的標本浸入無水酒精及各級酒精,使組織逐步接近水。3、蒸餾水略洗。
4、蘇木素溶液染色約5—15分鐘
5、自來水洗去多余染料。
6、入稀釋的鹽酸酒精溶液中分色,邊分色邊鏡檢,至核呈紅紫色,細胞質(zhì)無
色為合適。
7、分色后用自來水或加數(shù)滴氨水堿化,直至細胞核變成藍色。這一步驟也可稱為“藍化”。
8、入蒸餾水洗去堿性水分。
9、入70%酒精→80%酒精各5分鐘。
10、入伊紅染液染色30秒至數(shù)分鐘。
11、以95%酒精對伊紅分色,至胞漿,結(jié)締組織等呈桃紅色。
12、上行脫水:染色后的切片,因組織內(nèi)含水而不透明,不能清晰地觀察其微細結(jié)構(gòu)。因此,須將組織內(nèi)的水分經(jīng)各級酒精→無水酒精逐步置換,最后進入不含水份的透明劑內(nèi)。
13、透明:入二甲苯透明劑,二次(各數(shù)分鐘)。
14、取出切片:將組織周圍多余的二甲苯擦去,滴樹膠后加蓋玻片封固。
結(jié)果:細胞核藍紫色,胞漿、膠原纖維、肌纖維為桃紅色,嗜酸性顆粒為鮮紅色,彈性纖維呈明亮桃紅色。
二組織化學和細胞化學染色法
組織化學和細胞化學,是將物理和化學的技術(shù)運用到組織標本,用顯微鏡和化學分析方法來研究組織和細胞內(nèi)的化學成分,并觀察該化學成分在組織、細胞內(nèi)的定位、含量及其變化規(guī)律。這些化學成分借著化學反應所產(chǎn)生的不溶性著色物質(zhì)來顯示。對于某些化學成分,例如:Fe++糖原、核酸等,可以用直接或間接的化學反應產(chǎn)生著色沉淀而顯示其部位和相對含量。對于酶類,顯示它的活性,須有該種酶的底物(被該種酶作用的物質(zhì)),由酶對底物的分解,直接或間接地生成著色物質(zhì)而被顯示。凡是在光學顯微鏡下觀察細胞原位顯示的化學物質(zhì),稱組織化學,若用電鏡觀察細胞原位化學成分的著色部位,則稱電鏡細胞化學,下面從原理方面簡要介紹幾種常用的組織化學染色技術(shù):
1、顯示琥珀酸脫氫酶(SDH)活性的硝基-BT法:
(Succinate dehydrogenase)
⑴酶的定位及生物學意義:
琥珀酸脫氫酶是線粒體標志酶,其存在于所有有氧呼吸的細胞,和線粒體內(nèi)膜緊密結(jié)合。該酶不需輔酶而自身有黃素蛋白(FP,Flavoprotein)為輔基。在組化反應中常用來反映三羧酸循環(huán)的情況。其催化過程如下:
弱-單甲(紫紅色)
HOOC-CH2-CH2-COOHFPH2四唑(甲)↓
(有色)強-雙甲(深紫藍色)
(琥珀酸)(黃素蛋白)
HOOC-CH=CH=COOHFPH2四唑(無色)
(延胡索酸)
⑵原理:上述的反應最后一步的原理是,硝基-BT(Nitro-blue tetrozolyum,四唑氮藍)系異環(huán)族化合物四唑鹽,當它接受氫時,本身被還原為有色沉淀產(chǎn)物(甲
)(Formazan)。
⑶孵育液配制:
A液(貯備液)
0.2M磷酸緩沖液(PH7.6)10ml等量混合
0.2M琥珀酸鈉(S01.succinate) 10ml備用
B液:
硝基四唑(Nitro-Br)2mg
2ml
0.2M磷酸緩沖液(PH7.6) 2ml
?。篈液2ml
B液2ml孵育液
聚乙烯吡烷酮(PVP) 300mg
⑷方法:
①新鮮恒冷箱冷凍切片,厚6~8μm,平貼在蓋玻片上。
②滴染法:將有冷凍切片的蓋玻片(標本面朝上)平放于預熱好的培養(yǎng)皿中(底部墊一濕濾紙),滴加孵育液至全部覆蓋組織,于37℃溫箱中孵育45~60分鐘(肝,心肌組織15分鐘即可)。
③于生理鹽水中沖洗二次(輕晃,以防脫片)。
④10%福爾馬林生理鹽水固定10分鐘。
⑤15%酒精浸洗5分鐘(換二次)。
⑥甘油明膠封片。
⑸結(jié)果:酶活性強處呈藍色顆粒(雙甲沉淀),酶活性較低時形成紫紅色單甲。在光鏡下,該酶活性于肝小葉內(nèi)分布呈明顯分帶現(xiàn)象,周邊帶強于中央帶。在心肌細胞縱切面,酶活性顆粒沿心肌細胞長軸整齊排列,相鄰心肌細胞的空白處為閏盤。
2、顯示葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性的鉛法:
(Glucosel-phosphate phosphohydrolase)
①酶的定位及其生物學意義:
該酶主要位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng),是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的標志酶。G-6-Pase參與糖代謝,能水解葡萄糖-6-磷酸而釋放出葡萄糖和磷酸。
⑵原理:G-6-Pase將底物(葡萄糖-6-磷酸鉀鹽)水解產(chǎn)生磷酸離子,后者被孵育液中的硝酸鉛所捕獲,最終反應物為顆粒狀的硫化鉛沉淀,其反應式如下:
酶Pb(NO3)2
葡萄糖-6-磷酸鉀+H2O葡萄糖+磷酸
(NH4)2S
Pb2(PO4)2PbS↓
(無色)(棕色)
(試劑配制及方法詳見組織學技術(shù)專著)
⑶結(jié)果:酶活性部位呈棕色硫化鉛顆粒沉淀。在光鏡下G-6-Pase活性顆粒較均勻地分布于胞質(zhì)中。
3、顯示堿性磷酸酶(APL)的鈣鈷法(Alkaline phosphohydrolase)
⑴酶的定位及其生物學意義:
ALP在堿性環(huán)境下能催化各種醇和酚的磷酸酯水解,參與磷酸根的跨膜轉(zhuǎn)運過程,并有磷酸轉(zhuǎn)移的作用,故在細胞膜上運輸較活躍,如毛細血管內(nèi)皮細胞,腎近曲小管刷狀緣,腸上皮紋狀緣等處,該酶的活性較高。
⑵原理:ALP將磷酸鹽底物(如β-甘油磷酸鈉等)分解產(chǎn)生磷酸根離子,后者為孵育液中的氯化鈣捕獲生成磷酸鈣沉淀,但該沉淀為非金屬鹽,需加入硝酸鈷,使其生成磷酸鈷沉淀,因無色,再需通過硫化銨處理,形成棕黑色硫化鈷沉淀而被顯示。在PH9.2—9.4環(huán)境中表現(xiàn)最大活性。反應式如下:
ALPCa++
β-甘油磷酸鈉磷酸離子Ca2(PO4)2
Co(NO3)2(NH4)2S
CO2(PO4)2CoS↓
(無色)(棕黑色)
⑶結(jié)果:酶活性部位為棕黑色CoS沉淀。
4、顯示核酸的甲綠一派喏寧(Methyl green-pyronln)染色:
⑴原理:甲綠和派喏寧都是堿性染料,對兩種核酸(DNA和RNA)能分別染色,其機制可能在于兩種核酸分子都是多聚體,但聚合程度有所不同。甲綠具有兩個帶電荷的氨基,而派喏寧只有一個。因此在混合的染液中,二者競爭的結(jié)果是甲綠易與聚合程度較高的DNA結(jié)合呈現(xiàn)藍綠色,而派喏寧則與聚合程度較低的RNA結(jié)合呈現(xiàn)紅色。
(試劑制備及方法詳見組織學技術(shù)專著)
⑶結(jié)果:核內(nèi)DNA呈藍綠色,核仁及胞質(zhì)內(nèi)RNA呈桃紅色。
5、顯示糖原的過碘酸雪夫氏(PAS)反應:
⑴原理:糖原是一種動物多糖,無色,富含于肝細胞和肌細胞胞質(zhì)中。PAS反應(Periodic acid schiff Reaction)能在糖原所在部位生成紫紅色物質(zhì),從而將之顯示。RAS反應分為兩步:首先是強氧化劑過碘酸(Periodic acid,分子式為HIO4),將糖原中的葡萄糖分子的C-C鍵打開,將CHOH-CHOH氧化,生成二醛基,然后Schiff試劑中的無色亞硫酸品紅分子與糖的醛基結(jié)合,生成新的紫紅色復合物。
HIO4schiff試劑
多糖醛基紫紅色反應產(chǎn)物
(氧化)
(試劑配制及方法詳見組織學技術(shù)專著)
⑵結(jié)果:糖原呈紫紅色顆粒狀。
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種皮不必做石蠟切片,只有比較軟,切容易變形破壞的才做石蠟切片 如果想做也可以,參見以下,非常好!http://swzx.jlu.edu.cn/jpk/sykj/20051009/sl.files/frame.htm